یک تکنیک آزمایشگاهی که از زمان آنچه که به نظر می رسد طلوع زمان وجود داشته باشد ، وسترن بلات است و به نظر نمی رسد که به زودی ناپدید می شود. وسترن بلات که توسط دانشمندان در سراسر جهان استفاده می شود ، به یک تکنیک اساسی و قدرتمند در جعبه ابزار یک دانشمند تبدیل شده است. یکی از بازیکنان اصلی وراثت آن ، شیمی درمانی بهبود یافته Amersham (ECL) است که ECL اصلی برای اولین بار در دهه 1980 معرفی شده است. Amersham ™ ECL هنوز فروخته شده است و امروزه می توان در بسیاری از نیمکت های آزمایشگاهی یافت و نتایج عالی و قابل اعتماد را ارائه می دهد.
افت سریع در تاریخ وسترن بلات
در سال 1979 ، هنگامی که وسترن بلات برای اولین بار معرفی شد ، دانشمندان خود را برای صرف ساعات طولانی در قسمت های تاریک برای تهیه فیلمی برای گرفتن نتایج خود پیدا کردند1بشر محققان با معرفی بعدی Amersham ECL ، توانستند مقادیر کمی از پروتئین خاص را در یک نمونه تشخیص دهند ، که بازی را برای زیست شناسی مولکولی تغییر داد. در دهه 1990 ، اولین سازهای تصویربرداری دیجیتالی به جایگزینی برای فیلم تبدیل شد و نتایج قابل اطمینان تر ، قابل تکرار و سریع را ارائه می داد. از آن زمان ، وسترن بلات در بیش از 400000 نشر انتشار نشریه ذکر شده است و همچنان پایه و اساس تشخیص و تجزیه و تحلیل پروتئین ها در زیست شناسی مولکولی و پروتئومیک را ارائه می دهد2بشر
همیشه بعد از این همه سالها پاک کنید
با افزایش روشهای جایگزین مانند تست ایمنی در ارتباط با آنزیم (ELISA) ، ایمونوهیستوشیمی و طیف سنجی جرمی ، بسیاری تصور می کردند که وسترن بلات منسوخ می شود و سرانجام جایگزین می شود. با این حال ، با وجود این پیشرفت ها ، وسترن بلات مقاومت پذیر است و همچنان یک اسب نبرد آزمایشگاهی است که همچنان تحویل می دهد. دانشمندان به سادگی نمی توانند از سهولت استفاده از آن جدا شوند و نتایج سریع ، سودآور و قابل توجهی که ارائه می دهد ، برای اعتبارسنجی ویژگی آنتی بادی ها ، تشخیص تغییرات پس از انتقال و تأیید داده های پروتئومیکس بسیار مهم است.3بشر
چراغ ، دوربین ، تشخیص: تکامل تصویربرداری
جنبه ای از وسترن بلات که به تکامل خود ادامه می دهد ، تکنیک هایی است که برای تصویربرداری استفاده می شود. در حالی که فیلم X -ray زمانی یک هنجار بود ، محققان امروز بیشتر روی راه حل های تصویربرداری دیجیتال ، از جمله تصاویر دوربین با دستگاه بارگیری (CCD) و سیستم های مبتنی بر اسکنر حساب می کنند. ابزارهای مدرن مانند Amersham ™ IMMING ™ 800 تصویربرداری وسترن بلات Cytiva تصویربرداری مبتنی بر CCD است ، با اپتیک حساس فوجیفیلم و حالت بهینه سازی سیگنال / نویز (SNOW) ، که به طور خودکار تصاویر خالص را با بهترین نسبت سیگنال / نویز فراهم می کند. این سیستم ها با تشخیص باند های پایین در وسترن لکه ها ضمن بهبود کارآیی ، حساسیت را بهبود می بخشند ، به طور خودکار بهترین تصویر ممکن را ضبط می کنند و محققان را با از بین بردن نیاز به بهینه سازی قرار گرفتن در معرض و گرفتن پارامترهای ضبط آزاد می کنند.
هر بار وسترن بلات منسجم است
در حالی که وسترن بلات همچنان یک آزمایشگاه مورد علاقه است ، دانشمندان چالش تکرارپذیری 4 را می دانند. یک روز ، گروه ها واضح و تیز هستند و روز دیگر می توانند به عنوان یک اسمیر ادغام ظاهر شوند. سیستم های تصویربرداری مدرن مانند تصویر اسکنر لیزر Amersham ™ 800 و Amersham ™ Cytiva به محققان کمک می کند تا با پروتکل های تصویربرداری استاندارد و ابزارهای تجزیه و تحلیل قوی ، این چالش ها را برآورده کنند. Amersham Posting 800 نوری حساسیت بالایی و پارامترهای قرار گرفتن در معرض منسجم را برای نقل و انتقالات فلورسنت شفاف و شفاف ارائه می دهد ، و اسکنر تیفون Typhon Amersham یک اسکن فلورسانس چند چین با وضوح بالا با حساسیت قابل تنظیم ارائه می دهد. این دو سیستم شامل نرم افزار دوستانه کاربر برای کمیت خودکار هستند ، و اطمینان حاصل می کنند که نتایج واضح ، قابل اعتماد و قابل مقایسه بین آزمایشات است. با به حداقل رساندن تنوع ، سیستم عامل های تصویربرداری مدرن از نتایج قابل تکرار و قابل اعتماد تر پشتیبانی می کنند.
نتیجه گیری: سگ قدیمی ، نکات جدید
وسترن بلات مطمئناً نه تنها برای نتایج ارائه شده ، بلکه به دلیل سازگاری آن ، جایگاه خود را در معبد شهرت کسب کرده است. با ابزارهایی مانند Amersham ECL که همیشه می درخشد و فناوری تصویربرداری پیشرفته جدید ، و این باعث می شود تصویربرداری واضح تر و باهوش تر از همیشه باشد ، وسترن بلات به زودی جایی به دست نمی آید.
برای موفقیت وسترن بلات وسترن Cytiva با یک راهنما مشورت کنید و طیف کاملی از ابزارها و مواد مصرفی موجود را کشف کنید تا دریابید که چگونه می توانید تصاویر انتقال واضح تر ، قابل تکرار تر و سازگار را ایجاد کنید.
منابع
1. Sule R ، Rivera G ، Av Gomes. وسترن بلات (Immunotransfert): تاریخ ، تئوری ، استفاده ، پروتکل و مشکلات. بیوتکنیک. 2023 ؛ 75 (3): 99-114. doi: 10.2144 / btn-2022-0034
2. موریتز CP. 40 سال وسترن بلات: نان تست تولد علمی. J پروتئومیک. 2020 ؛ 212: 103575. doi: 10.1016 / j.jprot.2019.103575
3. Yang PC ، Mahmood T. Western Blot: تکنیک ، تئوری و دشواری. North Am J Med Sci. 2012 ؛ 4 (9): 429. doi: 10.4103 / 1947-2714.100998
4. Kroon C ، Breuer L ، Jones L ، et al. Bountes-Aveugles در وسترن لکه ها: ارزیابی مشکلات متداول در ارقام و روشهای وسترن بلات با توصیه هایی برای بهبود آنها گزارش شده است. Bertrand MJM ، ed. Biol PLOS. 2022 ؛ 20 (9): E3001783. doi: 10.1371 / journal.pbio.3001783
